桂亚萍,白艺兰,刘健,王建,赵洪进

• 1:上海市动物疫病预防控制中心

摘要(Abstract)：

为了解商用BT细胞系中牛病毒性腹泻病毒（BVDV）、牛细小病毒（BPV）、呼肠孤病毒3型（Reo3）、牛腺病毒（BAdV-3）、牛呼吸道合胞体病毒（BRSV）和牛副流感病毒3型（BPIV-3）6种病毒的污染情况，对购买的商用BT细胞进行病原PCR检测、细胞病变观察、上清液PCR检测，以及阳性病原部分基因序列的测序和分析。结果显示：对细胞培养液进行6种病毒的PCR扩增，仅BVDV出现特异性目的条带，其他病原均为阴性；目的条带测序后经BLAST分析，确定为BVDV阳性；7 d内BT细胞未出现细胞病变，细胞上清液可扩增出BVDV目的条带，并随着培养时间的增加条带亮度逐渐增强；通过基于BVDV 5'UTR、Npro和E2基因序列的遗传进化分析发现，该毒株与Oregon C24V毒株亲缘关系较近，为BVDV-1a型。结果表明，商用BT细胞存在BVDV-1a污染，因此应加强其相关生物制品的BVDV检测，防止BVDV污染扩散。

关键词(KeyWords)： BT细胞系;PCR检测;牛病毒性腹泻病毒

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 上海市科技兴农推广项目(沪农科推字[2022]第2-1号)

作者(Author): 桂亚萍,白艺兰,刘健,王建,赵洪进

参考文献(References)：

• [1]范学政，李翠，宁宜宝，等.病毒类疫苗中外源病毒污染、检测方法与控制措施[J].中国兽药杂志，2014,48(11):57-61.
• [2]张志，张美晶，董雅琴，等.猪用疫苗中牛病毒性腹泻病毒污染的检测与分析[J].中国动物检疫，2015,32(11):76-79.
• [3] GóMEZ-ROMERO N,VELAZQUEZ-SALINAS L,RIDPATH J F,et al. Detection and genotyping of bovine viral diarrhea virus found contaminating commercial veterinary vaccines,cell lines,and fetal bovine serum lots originating in Mexico[J]. Archives of virology,2021,166(7):1999-2003.
• [4]郭敏，鱼轲，刘军，等.牛源材料中BVDV检测方法的验证及应用[J].微生物学免疫学进展，2016,44(1):36-39.
• [5]曾维欢，李蓉，肖望成，等. 1型、2型牛病毒性腹泻病毒通用RT-PCR检测方法的建立与应用[J].中国动物检疫，2021,38(2):98-103.
• [6]常益铭，岳华，汤承.宁夏某肉牛场牛呼吸道疾病综合征相关病原检测及分型鉴定[J].中国动物检疫，2022,39(11):29-34.
• [7]王吉，卫礼，贺争鸣，等.呼肠孤病毒Ⅲ型（Reo3）RT-PCR检测方法的建立[J].中国比较医学杂志，2012,22(9):46-50.
• [8] VILCEK S,PATON D J,DURKOVIC B,et al. Bovine viral diarrhoea virus genotype 1 can be separated into at least eleven genetic groups[J]. Archives of virology,2001,146(1):99-115.
• [9] LANG Y,GAO S,DU J,et al. Polymorphic genetic characterization of E2 gene of bovine viral diarrhea virus in China[J]. Veterinary microbiology,2014,174(3/4):554-559.
• [10]张超，何金科，何延华，等.胎牛血清中牛病毒性腹泻病毒2型毒株分离及脱脂奶粉中抗体的检测[J].中国畜牧兽医，2020,47(7):2239-2247.
• [11]朱晓玮，王艳，许秀梅，等. 2012—2017年猪瘟活疫苗中牛病毒性腹泻病毒检测情况[J].中国动物传染病学报，2019,27(5):81-85.
• [12] WALZ P H,CHAMORRO M F,M FALKENBERG S,et al. Bovine viral diarrhea virus:an updated American College of Veterinary Internal Medicine consensus statement with focus on virus biology,hosts,immunosuppression,and vaccination[J]. Journal of veterinary internal medicine,2020,34(5):1690-1706.
• [13]王竞晗，李素，何文瑞，等.进口胎牛血清中牛病毒性腹泻病毒的分离及鉴定[J].中国生物制品学杂志，2016,29(3):308-311.
• [14] SHAH P T,NAWAL BAHOUSSI A,AHMAD A,et al.Bovine viral diarrhea virus in China:a comparative genomic and phylogenetic analysis with complete genome sequences[J]. Frontiers in veterinary science,2022:992678.
• [15] WANG H,WANG M,FENG X,et al. Genetic features of bovine viral diarrhea virus subgenotype 1c in newborn calves at nucleotide and synonymous codon usages[J].Frontiers in veterinary science,2022:984962.