猪伪狂犬病病毒LAMP可视化检测方法的建立Establishment of a Visualized LAMP Method for Detection of Pseudorabies Virus
许宗丽,黄溢泓,李志源,刘针伶,周师师,覃艳然,邱洁,盘美妮
摘要(Abstract)：
根据Gen Bank中猪伪狂犬病病毒(PRV)g B基因的保守序列,设计一套特异性引物,在对反应条件进行优化后,建立了PRV环介导等温扩增(LAMP)可视化检测方法。结果显示:该方法能在常规65℃水浴锅中30 min内实现对目的片段的特异性扩增,并且可通过肉眼观察颜色直接判定检测结果 ;该方法具有很高的特异性,与猪瘟病毒、猪圆环病毒2型等均无交叉反应;该方法的敏感性可达1 fg;将该方法应用于临床样品检测,结果与普通PCR方法一致。研究表明,本研究建立的LAMP方法简便、快速、灵敏、特异,适合基层PRV感染的快速检测。
关键词(KeyWords)： 猪伪狂病病毒;环介导等温扩增(LAMP);检测
基金项目(Foundation): 广西柳州科技项目(2015E040501)
作者(Author): 许宗丽,黄溢泓,李志源,刘针伶,周师师,覃艳然,邱洁,盘美妮
参考文献(References)：
- [1]POMERANZ L E,REYNOLDS A E,HENGARTNER C J.Molecular biology of pseudorbies virus:impact on neurovirology and veterinary medicine[J].Microbiology and Molecular Biology Reviews,2005,69(3):462-500.
- [2]殷震,刘景华.动物病毒学[M].北京:北京科学出版社,1997.
- [3]王军,张秀凤,王瑞.河南省猪伪狂犬病流行病学调查[J].江苏农业科学,2012,40(4):221-222.
- [4]邓仕伟,汪勇,薛春芳.我国伪狂犬病流行现状及新特点[J].动物医学进展,2006,27(9):105-107.
- [5]NOTOMI T,OKAYAMA H,MASUBUCHI H,et al.Loop-mediated isothermal amplification of DNA[J].Nucleic Acids Res,2000,28(12):63.
- [6]罗忠永,王印,杨泽晓.猪繁殖与呼吸综合征病毒LAMP检测方法的建立[J].动物医学进展,2016,37(1):1-5.
- [7]MARUYAMA F,KENZAKA T,YAMAGUCHI N,et al.Detection of bacteria carrying the stx2 gene by in situ loop-mediated isothermal amplification[J].Applied and environmental microbiology,2003,69(8):5023-5028.
- [8]范晴,谢芝勋,刘加波,等.牛病毒性腹泻病毒RTLAMP检测方法的建立[J].生物技术通讯,2010,21(2):248-251.
- [9]KUBOKI N,INOUE N,SAKURAI T,et al.Loopmediated isothermal amplification for detection of African trypanosomes[J].Journal of clinical microbiology,2003,41(12):5517-5524.
- [10]ENDO S,KOMORI T,RICCI G,et al.Detection of gp43of Paracoccidioides brasiliensis by the loop-mediated i s o t h e r m a l a m p l i f i c a t i o n(L A M P)m e t h o d[J].F E M S microbiology letters 2004,234:293-297.
- [11]汤丹,张文飞,张鑫雷.浅谈猪伪狂犬病及其防控与净化[J].中国畜牧兽医文摘,2016,32(11):137-138.
- [12]杨睿,杨金龙,王孝友,等.快速诊断伪狂犬病毒的LAMP方法的建立[J].中国兽医学报,2011,31(2):161-164.
- [13]王树芬,王德国,薛白,等.可视化LAMP快速检测猪伪狂犬病毒[J].河南农业科学,2012,41(6):140-143.
- [14]张莉,鄢明华,王东,等.猪伪狂犬病毒环介导等温扩增检测方法的建立[J].中国兽医科学,2011,41(7):723-727.