猪瘟病毒E0蛋白的表达与抗原性研究
王钰璇,姚凤,伏小平,王若聪,周清燕,刘坤,祝丽,王玉东,龚振华
摘要(Abstract):
本研究采用PCR技术,扩增猪瘟病毒E0蛋白191~227氨基酸基因片段,将其克隆到表达载体pET-30C质粒中,获得重组质粒30C-E0-1725。经酶切、PCR、序列分析,证明插入的目的基因有正确的编码框架。Westernblot试验表明,利用大肠杆菌表达的目的蛋白,能与CSFV阳性血清发生特异性反应,具有良好的抗原特异性。
关键词(KeyWords): 猪瘟病毒(CSFV);E0蛋白;克隆;表达
基金项目(Foundation): 青岛市科技发展计划项目,编号:05-1-NS-45。
作者(Author): 王钰璇,姚凤,伏小平,王若聪,周清燕,刘坤,祝丽,王玉东,龚振华
参考文献(References):
- [1]殷震,刘景华.动物病毒学[M].北京:科学出版社,1997.
- [2]Pringle C R.The universal system of virus taxonomy,updated to Include the new proposals ratified by the In-ternational Committee On Taxonomy of Viruses during1998[J].Arch Virol,1999,144(2):421-429.
- [3]MeyersG,Thiel H G.Molecular characterization of pestiviruses[J].Adv Vir Res,1996,47:53-118.
- [4]Mennig V.Pestivirus:a review.Vet.Microbiol.1990,23:35-54.
- [5]Hulst MM,Himes G,Moormann RJM.Glycoprotein E2of classical swine virus Expression in insect cells and i-dentification as a ribonuclease[J].Vi-rology.1994,200:558~565.
- [6]Bruschke C J M,Hulst MM,Moor-mann R J M.Glycoprotein Erns of pes-tiviruses induce sapopto sisinlym pho-cytes of several species[J].J.Viro.1997,71:6692~6696.
- [7]刘湘涛,韩雪清.猪瘟流行野毒Erns基因的序列分析.中国农业科学,2000,33(4):75~81.
- [8]Langedijk J P,Middel W G,Meloen R H,et al.Enzyme-linked immunosor-bent assay using a virus type-specific peptide based on a subdomain of en-velope protein E(rns)for serologic di-agnosis of pestivirus infections in swine.J.Clin.Microbiol.2001,39(3):906-912.
- [9]候云德.精编分子生物学实验指南[M].北京:科学出版社,2001.
- [10]郑增忍.水疱性口炎病毒N基因原核表达载体的构建及表达.西北农林科技大学学报[J],2004,32(5):5-8.
- [11]龚振华,王钰璇.一株猪瘟病毒田间株E0蛋白基因的克隆和序列分析的研究[J].中国动物检疫.2007,24(1).
- [12]萨母布鲁克J,拉塞尔DW,著.分子克隆实验指南[M].黄培堂,王嘉玺,朱厚础,等译.第3版.北京:科学出版社,2002.