- 石艳萍;邓飞;周丽媛;李丽;邵靓;陈斌;张孟思;邱明双;陈弟诗;
为建立快速区分3种猪圆环病毒（PCV2、PCV3和PCV4）的现场检测方法，采用微流控芯片环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification,LAMP），收集3种猪圆环病毒临床阳性样本进行核酸提取，与市场上3种猪圆环病毒荧光探针法检测试剂盒进行灵敏度、特异性和重复性同步比对。结果显示：微流控芯片LAMP法在3种猪圆环病毒联检测试中具有非常高的灵敏度，可以在30 min内，实现不低于荧光定量PCR法的敏感性；与非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒和猪细小病毒临床阳性样本均无交叉反应，特异性好；测试3种猪圆环病毒重复性Ct值变异系数（CV）均在2%以下，稳定性好。结果表明：3种猪圆环病毒微流控芯片快速联检技术特异性好、灵敏度高、重复性强，检测速度快，环境要求低，可以满足现场检测的要求，适用于养猪场等场所的猪圆环病毒现场快速检测。本方法的建立为猪相关病原体的现场快速核酸检测提供了有力工具。
2024年02期 v.41;No.369 58-64页 [查看摘要][在线阅读][下载 2135K]
[下载次数：432 ] |[网刊下载次数：2 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：2 ] - 李真亚;赵晓康;杨红玉;李允;孔嫄嫄;贾荣玲;李生涛;
为建立一种特异性强、灵敏度高的副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis,HPS）ELISA抗体检测方法，为副猪嗜血杆菌病的诊断及免疫抗体检测提供技术支撑，首先重组表达了HPS 2个具有免疫原性的蛋白（HbpA、AfuA），随后对HbpA、AfuA进行初筛，选择AfuA作为最佳包被蛋白。通过优化AfuA-ELISA反应条件，确定了最佳抗原包被质量浓度为5μg/mL，最佳封闭液为5%脱脂乳溶液，最佳样品稀释液为2%BSA溶液，最佳样品孵育时间为30 min，最佳样品稀释度为1:25，最佳酶标二抗稀释度为1:20 000，最佳酶标二抗孵育时间为30 min，最佳底物孵育时间为10 min。特异性试验显示，建立的AfuA-ELISA方法对猪其他常见病原阳性血清的检测结果均为阴性，表明其具有良较好的特异性。对300份临床样品进行检测，AfuA-ELISA方法分别检出阳性、阴性血清177、123份，与商业化试剂盒的阳性、阴性符合率分别为90.0%、87.5%，总体符合率为89.0%。结果表明，本研究建立的AfuA-ELISA方法具有特异性强、灵敏度高，与商业化试剂盒符合率高的优点，可以用于临床HPS抗体检测。
2024年02期 v.41;No.369 65-71页 [查看摘要][在线阅读][下载 1736K]
[下载次数：168 ] |[网刊下载次数：1 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 闫微;杨柳;龙云志;宋文博;李倩倩;余道兵;周明光;徐高原;黄超;汤细彪;
为建立一种快速高效的猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp）检测方法，根据NCBI公布的Mhp保守序列设计4对特异性引物，依据4对引物的荧光定量PCR检测结果及拟合曲线进行相关性分析，筛选出最佳引物（SX4），建立了Mhp SYBR Green Ⅰ实时荧光定量检测方法。该方法可特异性检测Mhp，对猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、副猪嗜血杆菌4型及链球菌2型等病原均无特异性扩增；最佳引物SX4检测的灵敏度可达4.9×101 copies/μL，组内和组间变异系数均小于2%。该方法可稳定检测出工艺生产抗原和市售疫苗中的Mhp菌量。试验表明，本研究成功建立了Mhp SYBR Green Ⅰ实时荧光定量检测方法，其特异性强、灵敏度高、重复性好，可用于Mhp疫苗抗原生产和临床疫苗中的Mhp菌量检测。
2024年02期 v.41;No.369 72-79页 [查看摘要][在线阅读][下载 2170K]
[下载次数：425 ] |[网刊下载次数：1 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：3 ] - 徐凤霞;孙万里;张亚文;常爽;王一新;赵鹏;
为比较血液和粪便等样品采用不同方法检测禽网状内皮组织增殖病毒（REV）的准确率，从而为制定禽网状内皮组织增殖病（RE）净化程序提供参考，利用鸡胚卵黄囊接种构建REV垂直传播感染雏鸡模型，分别采用DF-1细胞病毒分离、RT-PCR检测和荧光定量RT-PCR检测，对1日龄雏鸡血液和胎粪样品，7～70日龄鸡（每隔1周）的血液和泄殖腔棉拭子样品，进行REV检测和结果比较。结果显示：对1日龄出壳的SPF鸡血浆进行检测，荧光定量RT-PCR灵敏度最高，阳性检出率为100%(25/25)，其次为病毒分离，阳性检出率为96%(24/25),RT-PCR检出率最低；对1日龄出壳的SPF鸡胎粪进行检测，荧光定量RT-PCR与病毒分离灵敏度一致，阳性检出率均为80%(20/25),RT-PCR检出率最低，为28%(7/25)。对7～70日龄鸡（每隔1周）进行血液和泄殖腔棉拭子检测，3种方法阳性检出率与1日龄检测情况总体相似，检出率从高到低依次为荧光定量RT-PCR、病毒分离和RT-PCR。结果表明，在同一检测时间点使用同一检测方法，胎粪/泄殖腔棉拭子REV阳性检出率基本低于血液检出率。本研究初步比较了不同方法检测REV人工感染鸡胚孵化雏鸡的带毒情况，为实施REV净化奠定了基础。
2024年02期 v.41;No.369 80-85页 [查看摘要][在线阅读][下载 1636K]
[下载次数：104 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：6 ] - 高志强;汪琳;刘环;白子龙;赵相鹏;蒲静;张伟;
H5亚型禽流感为人兽共患病，可严重威胁人类和动物健康。直接对样品进行禽流感病毒靶向全基因组测序、系统进化分析，对于揭示禽流感病毒分子特征具有重要作用。本研究采用第三代靶向纳米孔测序技术，对1份禽流感病毒阳性拭子样品进行了全基因组测序。序列鉴定结果显示，病毒为H5N5亚型禽流感病毒，序列覆盖度达96.44%，仅PB1基因约480 bp的序列未被测出；HA蛋白裂解位点含有5个连续的碱性氨基酸，具备高致病性禽流感病毒分子特征，未发现向SAα2-6 Gal受体基因转变的氨基酸突变；HA基因进化分析结果显示，病毒为2.3.4谱系，NA基因为欧亚谱系。本研究采用靶向纳米孔测序技术，成功对灭活禽泄殖腔拭子中的禽流感病毒进行了基因组测序，证实该技术快速、便捷，可直接用于拭子样品的病毒全基因组测序，适用于动物流感病毒的快速分子鉴定与溯源。
2024年02期 v.41;No.369 86-91页 [查看摘要][在线阅读][下载 1941K]
[下载次数：260 ] |[网刊下载次数：1 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：6 ] - 韩金泽;牛鑫鑫;王国栋;葛成菲;张玉龙;黄萌萌;许萌萌;于航博;刘润杭;韩京哲;吴子文;于晓雪;高玉龙;李留安;祁小乐;
传染性法氏囊病（infectious bursal disease virus,IBD）是由传染性法氏囊病病毒（infectious bursal disease virus,IBDV）引起的一种主要危害雏鸡的急性传染病。在IBDV编码的5个蛋白中，VP5是IBDV唯一可以缺失基因的蛋白。本研究克隆了IBDV优势流行毒株的VP5蛋白编码基因，利用原核表达系统表达了VP5蛋白，通过免疫BALB/c小鼠制备VP5多抗，并对多抗进行了鉴定和检测不同IBDV毒株的应用。结果显示，IBDV优势流行毒株的VP5蛋白实现了可溶性表达，分子质量约为17 kDa；制备的VP5多抗特异性良好，ELISA效价可达1:64 000;VP5多抗可通过IFA和Western Blot检测识别IBDV rHLJ0504-HT株，不识别VP5基因缺失株。结果表明：试验成功表达了IBDV优势流行毒株的VP5蛋白，并制备了VP5多抗；VP5多抗可对IBDV及其VP5编码基因缺失毒株进行鉴别检测。本研究对于IBDV检测方法的建立以及VP5编码基因功能的进一步研究提供了物质基础。
2024年02期 v.41;No.369 92-98页 [查看摘要][在线阅读][下载 1767K]
[下载次数：494 ] |[网刊下载次数：1 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：4 ] - 汪洪冰;郭永祥;张朝阳;黄建龙;张坤;林源;
为比较不同品牌胶体金免疫层析试纸条/卡（简称试纸条/卡）检测牛羊布鲁氏菌病的效果，利用抗体布鲁氏菌阴阳性血清，对6种品牌试纸条/卡的准确性及灵敏度进行观察比较；同时按不同试纸条/卡操作方法对经虎红平板凝集试验（RBPT）初筛和竞争酶联免疫吸附试验（cELISA）复核的临床牛羊血清样品进行检测比较。结果显示：不同试纸条/卡对布鲁氏菌企业标准阴阳性血清检出率均为100%，其中2种试纸条/卡敏感性高，对不同稀释倍数阳性血清均可检出；试纸条/卡对临床阴性血清均100%检出，但对临床阳性血清样品的检测结果差异较大，其中对羊阳性血清样品的检出率为5.88%～70.59%，对牛阳性血清样品为50.0%～100.0%。结果表明，不同品牌试纸条/卡在布病检测时存在一定差异。建议使用试纸条/卡进行布鲁氏菌病初筛后，应结合国家相关布病诊断技术进行复检，以确保检测结果的准确性。
2024年02期 v.41;No.369 99-102页 [查看摘要][在线阅读][下载 1635K]
[下载次数：186 ] |[网刊下载次数：3 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：12 ] - 高丽艳;杨晓燕;台晓媛;喻永福;张俊雄;李继明;段纲;李本能;李学德;陈关雄;
为探究一种适合基层同时开展山羊口蹄疫（FMD）和小反刍兽疫（PPR）疫苗免疫的方法和剂量，选取64只山羊随机分为4组，即常规免疫组（对照组）以及1.0、1.2和1.5头份剂量组（试验组），开展FMD和PPR疫苗常规免疫和不同免疫剂量同步分点注射免疫的效果比较。结果显示：使用上述两种疫苗，采用常规免疫和一次性分点同步注射免疫的方法，以不同免疫剂量同步分点注射接种后，被免疫山羊未出现免疫应激反应；以不同免疫剂量接种后14、28、42、56、70、100和160 d，各组山羊FMD O型、A型以及PPR免疫抗体阳性率差异均无统计学意义（P> 0.05）。在接种后14 d,1.2头份剂量组FMD O型免疫抗体阳性率高于1.0和1.5头份剂量组；在接种后100 d,1.5头份剂量组FMD O型免疫抗体阳性率高于其余两剂量组；接种后14 d，对照组山羊FMD A型免疫抗体阳性率为87.5%，其余各组均可达到100%，并维持至接种后100 d。各组山羊PPR抗体阳性率均在接种后14 d达到100%，并持续保持至接种后160 d。结果表明：在试验免疫剂量范围内可开展山羊FMD和PPR疫苗一次性分点同步免疫接种工作，FMD疫苗最佳免疫注射剂量为1.2头份，PPR疫苗为1.0头份，在接种14 d后开展免疫效果监测较好。本研究为基层动物防疫员高效、便利开展山羊FMD和PPR疫苗免疫工作提供了参考。
2024年02期 v.41;No.369 103-107页 [查看摘要][在线阅读][下载 1668K]
[下载次数：120 ] |[网刊下载次数：4 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：12 ] - 沈娜;麻文静;苏红萍;陈瑞;肖普辉;武永杰;代德华;李准;赵光明;杨文欢;吴艳;马飞;王峰;张磊;冯平;
为探究不同佐剂对猪流行性腹泻灭活疫苗免疫效果的影响，选用水包油佐剂A(O/W)、油包水佐剂B(W/O)和双相佐剂C(W/O/W)3种不同佐剂配制疫苗，分别接种3～5日龄仔猪后攻毒，综合评价不同佐剂的免疫效果。结果显示：A、B佐剂组疫苗免疫猪的抗体水平低于C佐剂组；攻毒后进行猪流行性腹泻病毒检测发现，仅C佐剂组试验猪全部呈阴性；剖检所有疫苗免疫组试验猪均未发现脏器病变。结果说明：双相佐剂制备的灭活疫苗免疫效果明显优于水包油和油包水佐剂疫苗，且安全性较高，可优先选择双相佐剂制备猪流行性腹泻灭活疫苗。本研究为猪流行性腹泻疫苗制备、生产提供了技术支撑。
2024年02期 v.41;No.369 108-112页 [查看摘要][在线阅读][下载 1753K]
[下载次数：412 ] |[网刊下载次数：1 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：12 ] - 张倩;楚电峰;赵修龙;阮国宏;王秀妮;胡潇;
2023年1月22日，1只4岁雌性比熊犬出现呕吐、吐黄水、食欲减退、体质量下降等症状。通过临床观察、血常规检查、生化检测、电解质检测和促肾上腺皮质激素（ACTH）刺激试验进行诊断。血常规检查结果显示，红细胞压积和红细胞数目升高，提示患犬严重脱水；生化检测结果显示，肌酐、尿素氮含量增加，提示患犬肾功能异常；电解质检测结果显示，患犬出现低钠、高钾与低氯血症，为艾迪森特征性血症；ACTH刺激试验结果显示，肾上腺皮质机能减退。综合上述结果，确诊该犬患有艾迪森病。通过止吐，纠正低血压和低血容量，调节电解质平衡，纠正低血糖，增强食欲以及皮下注射地塞米松磷酸钠注射液或口服波尼松龙片等进行治疗，患犬预后良好。本病例为犬艾迪森病的诊断分析与治疗方案制定提供了参考。
2024年02期 v.41;No.369 113-116页 [查看摘要][在线阅读][下载 1533K]
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